ICS65.020.01 B 16 中华人民共和国国家标准 GB/T 31806—2015 马铃薯V病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Potato virus V 2015-07-03发布 2015-11-27实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T31806—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国云南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：李桂芬、李曼、马洁、鲁洁、张永江、孔君、魏梅生。 I GB/T31806—2015 马铃薯V病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了植物检疫中马铃薯V病毒的检疫鉴定方法。 本标准适用于马铃薯块茎、组培苗等繁殖材料中马铃薯V病毒的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样 3仪器设备及试剂 3 3.1 仪器设备 凝胶成像系统、隔离温室、恒温水浴、低温冰箱等。 微量移液器（2μL，10μL，20μL，100μL，200uL，1000μL）、酶联板、研钵、离心管、花盆、灭菌 土等。 3.2试剂 酶联免疫吸附测定试剂见附录B,RT-PCR检测试剂见附录C,实时荧光RT-PCR检测试剂见 附录D，生物学测定试剂参见附录E。 4抽样与样品制备 4.1抽样 抽样按照SN/T2122的规定进行。 4.2马铃薯块茎样品的制备 将马铃薯块茎播于灭菌土中，于25℃生长并进行症状观察。待长出约10片叶后将表现症状的植 株编号，未表现症状的植株分组（10株为一组）并编号。采集叶片用于酶联免疫测定、RT-PCR检测、实 时荧光RT-PCR检测及生物学测定。 4.3 组培苗样品制备 将每瓶组培苗中的每个植株都进行采样，每瓶组培苗所采样品作为一个加样样品用于酶联免疫测 定、RT-PCR检测、实时荧光RT-PCR检测及生物学测定 1 GB/T31806—2015 5 检测方法 5.1 酶联免疫吸附测定 见附录B。 5.2 RT-PCR检测 见附录C。 5.3 实时荧光RT-PCR检测方法 见附录D。 5.4 生物学测定 参见附录E。 6 结果判定 样品经酶联免疫吸附测定为阴性或RT-PCR检测为阴性或实时荧光RT-PCR检测为阴性，判断待 检样品不携带马铃薯V病毒。 样品经酶联免疫吸附测定为阳性，RT-PCR检测或实时荧光RT-PCR检测为阳性，即可判断待检 样品携带马铃薯V病毒。必要时可进行生物学测定。 7样品保存与结果记录 7.1 样品保存 经检测确定携带马铃薯V病毒的样品应在合适的条件下保存，块茎可在4℃保存6个月，组培苗 可在一20℃或一80℃冰箱中保存1年，做好标记和登记工作 7.2 结果记录 完整的记录包括：样品的来源、时间、地点、方法和结果等，并应有经手人和实验人员的签字。酶联 测定应有酶联板反应的原始数据，RT-PCR检测应有电泳结果图片，实时荧光RT-PCR检测应有反应 原始数据，生物学测定应有鉴别寄主的症状照片。 N GB/T31806—2015 附录A （资料性附录） 马铃薯V病毒相关资料 A.1 背景资料 A.1.1 基本信息 学名：PotatovirusV,缩写：PVV。 分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyuiridae），马铃薯Y病毒属（Potyuirus）。 A.1.2 2方法原理 根据马铃薯V病毒与抗体之间的特异性反应，对植物样品进行ELISA检测：根据该病毒核酸的序 列进行PCR特异性检测，通过电泳条带大小进行结果判定；根据该病毒核酸序列设计特异性引物和荧 光探针，通过检测的荧光信号进行结果判定。条件允许的情况下，根据马铃薯V病毒侵染寄主的症状 特点，进行生物学检测。 A.2 寄主范围 马铃薯V病毒自然侵染仅限马铃薯。 A.3 病害症状 侵染的植株叶片灰白，新生叶变小，轻度扭曲，可能发展为花叶和坏死斑。 A.4分布地区 分布于秘鲁、法国、荷兰和英国。 A.5 传播方式 蚜虫传播，传播马铃薯V病毒的蚜虫种类为Myzuspersicae、Brachycaudushelichrysi、Macrosi phum euphorbiaeRhopalosiphoninus latysiphon A.6 粒体形态 线状粒体，直径11nm~13nm，主体长度为760nm。 21 3