说明:收录25万 73个行业的国家标准 支持批量下载
文库搜索
切换导航
文件分类
频道
联系我们
问题反馈
文件分类
联系我们
问题反馈
批量下载
SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3932—2014 出口食品中蜡样芽孢杆菌快速检测方法 实时荧光定量PCR法 Rapid detection of Bacillus Cereus for export foods- Real-timePCRmethod 行业标准信息服务平台 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3932—2014 前言 本标准依照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国上海出人境检验检疫局、上海交通大学、中华人民共和国湖北出 人境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局 本标准起草人:杨捷琳、施春雷、谌鸿超、曾宪东、杨柳、贾俊涛、何宇平、潘良文、张继伦、姜英辉。 行业标准信息服务平台 SN/T3932—2014 出口食品中蜡样芽抱杆菌快速检测方法 实时荧光定量PCR法 1范围 本标准规定了出口食品中蜡样芽孢杆菌的实时荧光定量PCR检测方法。 本标准适用于出口食品中蜡样芽抱杆菌的快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T4789.14食品卫生微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验 3测定方法 3.1方法提要 本标准采用锁核苷酸(LNA)探针特异性检测蜡样芽孢杆菌。该探针利用了单核苷酸多态性 (SNP,SingleNucleotidePolymorphism)的原理,利用蜡样芽孢杆菌区别于其他种芽孢杆菌的特异位点 进行检测。 3.2试剂和材料 除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂水为无菌双蒸水。 3.2.1引物: 5'-CCTTCTTCAAGTTCAAATCTCG-3 5'-GTYGTAATGACAGGTGATGGA-3 3.2.2锁核苷酸(LNA)探针: 注:表示该位点为锁核苷酸位点 3.2.3 Taq DNA 聚合酶。 3.2.4dNTP:dATP,dTTP、dCTP、dGTP。 3.2.5DNA提取试剂:0.1%Chelex100水溶液。 3.2.6 10XPCR缓冲液:200mmol/LTris-HCl(pH8.4),200mmol/L氯化钾,15mmol/L氯化镁。 3.2.7LB培养基:称取酪蛋白陈10g,酵母提取物5g,NaCl10g,溶于1L水中,调节pH值至7.0,高 压灭菌。 3.2.8蜡样芽孢杆菌质控菌株:ATCC14579或等效菌株。 3.3仪器和设备 3.3.13 荧光PCR仪。 3.3.2 2离心机:20000r/min。 1 SN/T 3932—2014 3.3.3 移液器:2.5μL、20μL、200μL1000μL。 3.3.4水浴锅。 3.4检验步骤 3.4.1增菌 3.4.1.1冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2℃~5℃不超过18h解冻,若不能及时检验,应 放于一18℃左右保存;非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于2℃~5℃冰 箱保存,24h内检验。 3.4.1.2称取样品25g,放人盛有225mLLB培养基(见3.2.7)的无菌均质杯内,用旋转刀片式均质器 以8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mLLB培养基的无菌均质袋中,用 拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,吸取25mL样品至盛有225mLLB培养基的无菌锥 形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中,振荡混匀,作为1:10的样品匀液。根据对样品污染状况 的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)30℃1℃,培养9h~18h。 3.4.2模板DNA准备 每瓶培养的菌液分别取1mL加到1.5mL无菌离心管中,8000r/min离心5min,尽量吸弃上清: 加人50μLTE溶液及终浓度为3mg/mL的溶菌酶,室温孵育10min,孵育完毕后沸水浴5min(也可 验,可将上清液于一20℃保存)。 3.4.3荧光PCR检测 3.4.3.1反应体系总体积为25μL,其中含:10×PCR缓冲液2.5μL、dNTP(10mmol/L)1μL、引物对 (10μmol/L)各1μL、TaqDNA聚合酶(5U/μL)0.5μL、探针(2μmol/L)1μL、水15.5μL、模板DNA 2.5μL。反应条件:95℃10min;95℃15s,60℃1min,60℃时收集FAM荧光,共进行40个循环。反 应产物可在4℃保存,必要时可进行电泳或测序等确证工作。 3.4.3.2检测过程中分别设阳性对照、阴性对照,阳性对照(3.2.8)为标准菌株基因组DNA或是扩增 片断的阳性克隆,阴性对照以2.5uL无菌水作为模板 3.5结果与报告 3.5.1阳性对照C,值<30,阴性对照无扩增时,该检测结果有效。检测样本C,值小于或等于35.0时, 报告蜡样芽孢杆菌筛选阳性;检测样本C,值大于35.0且小于40.0时,重复一次·如果C,值仍小于 40.0,且曲线有明显的对数增长期,可报告蜡样芽孢杆菌筛选阳性,否则报告蜡样芽抱杆菌未检出;样品 检测无明显扩增曲线时,报告蜡样芽孢杆菌未检出。 3.5.2阳性样本按GB/T4789.14进行确证。 3.5.3报告每25g样品中检出或未检出蜡样芽孢杆菌。 3.6废弃物处理和防止污染的措施 收集检测过程中的废弃物,经121℃高压处理后丢弃。
SN-T 3932-2014 出口食品中蜡样芽孢杆菌快速检测方法 实时荧光定量PCR法
文档预览
中文文档
5 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助2元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共5页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助2元下载
本文档由 SC 于
2023-03-15 12:29:10
上传分享
举报
下载
原文档
(589.4 KB)
分享
友情链接
GB-T 13869-2017 用电安全导则.pdf
DL-T 5783-2019 水电水利地下工程地质超前预报技术规程.pdf
GB-T 36957-2018 信息安全技术 灾难恢复服务要求.pdf
GB-T 20721-2022 自动导引车 通用技术条件.pdf
DB-T 64-2016 强震动观测技术规程.pdf
DB36-T 1477-2021 碳普惠平台运营管理规范 江西省.pdf
GB-T 32812-2016 金属加工液 有害物质的限量要求和测定方法.pdf
GB-T 39044-2020 政务服务平台接入规范.pdf
GB-T 19557.5-2017 植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南 大白菜.pdf
T-CESA 1143—2021 电子凭据 版式文档格式.pdf
DB65-T 4458-2021 南疆盐碱地土壤调理剂施用技术规程 新疆维吾尔自治区.pdf
GB-T 13915-2013 冲压件角度公差.pdf
GB/T 6165-2021 高效空气过滤器性能试验方法 效率和阻力.pdf
DB15-T 1109-2017 信用信息系统运行维护管理规范 内蒙古自治区.pdf
GB-T 34131-2023 电力储能用电池管理系统.pdf
GA-T 460.5-2020 居民身份证卡体材料及打印薄膜技术规范 第5部分:打印薄膜.pdf
T-CAAMTB 66—2022 汽车电子助力制动系统总成耐久性能要求及台架试验方法.pdf
T-CFA 03110323—2022 铸件加工单元数字化技术要求.pdf
证券研究报告 - 2023.1.20 - 从CHAT_GPT到生成式AI(Generative+AI):人工智能新范式,重新定义生产力.pdf
CSA AI安全白皮书.pdf
交流群
-->
1
/
3
5
评价文档
赞助2元 点击下载(589.4 KB)
回到顶部
×
微信扫码支付
2
元 自动下载
官方客服微信:siduwenku
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。