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ICS_11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 575--2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术 Diagnostic techniques for infectious bovine rhinotracheitis 行业标准信息服务平台 2002-08-27 发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 575—2002 前言 牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,简称IBR)是由牛疱疹病毒1型(BHV-1)感 染家养牛和野生牛引起的一种病毒性传染病,被世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimal Health(英),OfficeInternationaldesEpizooties(法),OIE列为B类疾病,我国农业部列为二类动物疫 病。该病广泛分布于世界各地,该病死亡率较低,许多感染牛呈亚临床症状经过,往往由于细菌继发感染 导致更为严重的呼吸道疾病。本标准所规定的技术与OIE推荐的相应技术一致。 本标准的附录A、附录B为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:农业部动物检疫所。 本标准主要起草人:封启民、李昌琳、李晓成、李其平。 行业标准信息服务平 NY/T 575—2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术 1范围 本标准规定了牛传染性鼻气管炎(IBR)诊断技术要求。 本标准规定的病毒分离方法适用于牛传染性鼻气管炎病毒的分离;微量血清中和试验和酶联免疫 吸附试验适用于牛群检疫、流行病学调查及牛群抗体水平的检测。 2牛传染性鼻气管炎病毒分离鉴定 2.1材料准备 2.1. 1病料的采集 2.1.1.1呼吸道拭子:用灭菌拭子伸人鼻道采取分泌物,然后放入含青霉素1000IU/mL,链霉素 1000μg/mL,pH7.2的Earles液中。也可用棉拭子刮取眼分泌物,并用相同的方法处理。 2.1.1.2阴道拭子:用棉拭子采集脓疱性外阴阴道炎早期病变的阴道黏液,放人含青霉素 1 000 IU/mL,链霉素1 000 μg/mL,pH7.2的 Earles 液中。 2.1.1.3脑组织样品:在剖检时无菌采集脑组织。 2.1.1.4流产胎儿组织样品:刚死亡的胎儿,无菌采集肺、肾、脾等各种组织样品,放入每1.0mL含有 1000IU青霉素,1000μg链霉素,pH7.2的Earles液中。 2.1.1.5精液:至少采集新鲜精液,或冷冻精液0.5mL,置液氮中保存备用。 2.1.2样品的运送 采集的样品立即放人4℃冰箱保存,在24h内送到实验室。 2.1.3样品处理 2.1.3.1收到棉拭子样品后,先经冻融两次,并充分振动,拧干棉拭子,将样品液经10000r/min离心 10min,取上清液作为组织培养的接种分离材料。 2.1.3.2组织样品先用Earles液或Hanks液(pH7.2)制成20%的匀浆悬浮液,再经10000r/min离 心10min,取上清液作为接种分离材料。 2.1.3.3精液冻融两次或超声波裂解,再经10000r/min离心10min,新鲜精液通常对细胞有毒性, 在接种前应预先作稀释处理,用Earles液作1:15稀释。 2.2操作方法 样品接种:取经处理过的样品0.2mL接种到已形成良好单层的牛肾或睾丸原代或次代细胞培养 瓶中。每份样品接种4瓶,于37℃吸附1h后,倾去接种液,用Earles液洗三次,最后加人含3%(不含 IBR抗体)的牛血清细胞维持液1 mL。置 37℃培养,逐日观察细胞病变;若7天仍不出现致细胞病变, 则收获培养物继代于新制备的细胞上,盲传三代后,观察细胞病变,出现病变者收获培养物,保存于 一70℃待鉴定。 2. 3 病毒鉴定 病毒致细胞病变特点是细胞变圆,聚合,呈葡萄串状、拉网状,最后脱落。取出现上述病变的细胞培 养物,经冻融、裂解两次后,以10000r/min离心10min,取上清再作下列试验。 1
NY-T 575-2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术
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